操作方法：對潔淨車間用食品廠臭氧（yǎng）機{車（chē）間（jiān）臭氧（yǎng）機}滅（miè）菌1小時後（hòu）進行沉降菌檢測

名稱：潔淨區微（wēi）生物檢測操作規程

關鍵詞（cí）：潔淨區、微生物檢測、食品廠臭氧機、車間臭氧機（jī）

目（mù） 的：尋得優質食品廠臭氧機、車間臭氧機廠家 並規（guī）範潔淨區微生物檢測

背景知識：略

原（yuán）理：空氣源風冷臭氧滅菌

適用範圍：100級、1萬、10萬、30萬級潔淨區環境。

1.         沉降（jiàng）菌檢測

1)        在萬級潔（jié）淨區內的關鍵操（cāo）作點和潔淨室內每周檢測一次沉降菌和浮遊菌；在10萬（wàn）級潔淨區內其檢測頻次為每月檢測一次。30萬級每（měi）季度檢測一次沉降菌。

2)        由微生物檢測員按《養基（jī）的配製操作（zuò）規程的要求配製肉（ròu）湯瓊脂培養基，培養皿使用Φ90mm×15mm，於121℃濕熱滅菌20分（fèn）鍾，取出備用。

3)        做（zuò）好潔淨區消毒工作，開啟潔淨區淨化空調係統，正常運行不少於30分鍾；對單向流如100級的淨化（huà）工作台和層流罩（zhào）要（yào）在淨化係統運行10min後（hòu）開始。

4)        靜態測試在除測試人員外（wài），室內無生產人員的情況下進行，動態測（cè）試在已處於正常生產狀態下進行。

5)        采樣（yàng）點（diǎn）布置選用對角線法，要求布置地麵四個方向，工作線上左右，關鍵設備頂上放置一個。

6)        萬級、10萬級、30萬級的最少采樣點（diǎn）數可按下表確定。

在滿足（zú）最少測點數的同時，還宜滿足最少培養皿數，見下表

7)        百級區隻有淨化工作台下的局部範圍，其麵積小於10m2，因此百級區取樣點至少為3個。

8)        測試（shì）人員按潔淨室級別規定的程序更換潔淨服（fú）進入潔淨區；靜態測試時，室內人員不得（dé）多於2人。

9)        將製備好的肉湯瓊脂培養基按采樣點布點位置離地（dì）0.8～1.5m處放置，打開培養皿蓋，暴露30分鍾，檢測人員及時（shí）填寫記錄，記（jì）錄房間溫（wēn）濕度，壓差（chà）及測試狀態。

10)     蓋好皿蓋，將培養皿倒置於恒溫培養箱內，在30～35℃中（zhōng）培養48小時，並用3隻培養皿作對照。

11)     用透射光於培（péi）養皿背麵或正麵仔細（xì）觀察平皿上所有菌落數，要注意（yì）菌落與培養（yǎng）基沉澱物（wù）的（de）區別，然後用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。

12)     計算平均菌落數 =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號培養皿菌落數（shù），M2：2號培養皿菌（jun1）落數，n： 培養皿（mǐn）數。

13)     用平均菌落數（shù）判斷潔淨室空氣中的微生物， 潔淨區的平均菌（jun1）落數（靜（jìng）態測（cè）試）：100級≤1個/皿，萬級≤3個（gè）／皿，10萬級≤10個／皿，30萬級≤15個／皿。

14)     如超過標準（zhǔn），則（zé）必（bì）須對此區（qū）域重新消毒，重新（xīn）采樣（yàng）兩次，測試結果均須合格（gé）；否則要向質量管理部經理通報，並采取相應的（de）措（cuò）施（shī）。

15)     檢測人員必須向QA部門發“潔淨（jìng）級別檢測記錄”，取樣和微生物（wù）培養及檢測人員均要在記（jì）錄（lù）上簽名，QA部（bù）門（mén）主管（guǎn）審核，記錄由質（zhì）量管理部保存（cún）三（sān）年。

2.         浮遊菌檢測

1)        對萬級和10萬級潔淨區要進行浮遊菌的檢測，在萬級區內的關鍵操作點和潔淨室內每周檢測一次，10萬級（jí）潔淨區內其檢測頻次為每月檢測一次。

2)        浮遊菌（jun1）取（qǔ）樣使用浮遊菌采樣器，采樣器必（bì）須要有流（liú）量計和定時量，並按（àn）儀器（qì）的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保（bǎo）證測試數據的（de）可靠性。

3)        采樣（yàng）器進入（rù）被測（cè）房間前要先用消毒（dú）劑滅菌，用於100級潔淨室（shì）的采樣器最好是一直（zhí）放（fàng）在房間（jiān）內（nèi）；采樣時使（shǐ）用規（guī）定為Φ150mm×15mm培養皿（mǐn）。

4)        由微（wēi）生物檢測（cè）人員按《培養基的配製（zhì）操作規（guī）程》的要求配製營養瓊脂培養基，於121℃濕熱滅菌20分鍾，取出備用。

5)        浮遊菌取樣與沉降菌一（yī）樣可分為靜態測試和動態測試兩種狀態；各種潔淨度的采樣點數目（mù）和最小采樣量如下表（biǎo）所（suǒ）示。

浮遊菌取樣點數目及最小采樣量

6)        采樣點（diǎn）布點位置離地0.8～1.5m處放置，送風口測點位置離開送風麵30cm左右；可在關鍵設備或關鍵工作活動範圍增加測點；采樣點的布置與5)相同。

7)        對單向流如l00級淨（jìng）化工作台，測試（shì）要在淨（jìng）化（huà）空調係統正常運行不少於l0min後開始；對非（fēi）單（dān）向（xiàng）流，如緩衝室、培養（yǎng）室，測試（shì）要在淨化空調係統正常運行不少於30min後開始。

8)        采樣（yàng）者必須穿戴與被測潔淨區域相應（yīng）的工作服，在轉盤上放入或調（diào）換培養皿前（qián），雙手要（yào）用消毒劑消毒；培養皿表麵必須嚴格消毒。

9)        采樣口及采樣管在使用前必須高（gāo）溫滅菌（jun1），要用消毒（dú）劑（jì）消毒采樣器的頂盤，轉（zhuǎn）盤以及罩子的內外麵；對采（cǎi）樣管的外壁和內壁進行消毒（dú）後，要將管中的殘留液倒（dǎo）掉並晾幹（gàn）。

10)     儀器經消毒後先不放入培養皿，先接通電源，啟動（dòng）真空（kōng）抽氣泵抽氣不（bú）少於5min，使儀器中的（de）殘餘消（xiāo）毒劑蒸發。

11)     調好流量，轉盤轉速，已知采樣器（qì）的流量（L/min ），設定采樣時間(min)，相乘（chéng）即（jí）采樣（yàng）量(L)；關閉真空（kōng）泵。

12)     檢查每個培養皿的質量，培養基及培養皿有變質、破損或（huò）汙染的不能使用，放入培養皿，蓋上蓋子後調節采樣器縫隙高度。

13)     對於單向流或逆風口，采（cǎi）樣器采樣管（guǎn）口朝向應正對氣流方向，對於非單向流采樣管口向（xiàng）上，布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口lm以上。

14)     除百級區外，在其他潔淨室采樣時（shí），要在送風口和關鍵部位各進行一次采樣，每（měi）個采樣點隻采樣一次。

15)     置采樣口於（yú）采樣點後，開啟采樣器（qì），采樣（yàng）時，測試人員要站在采樣口的下風側，靜（jìng）態測試（shì）時，室內人（rén）員不得多於2人。

16)     采樣結束後取出培養皿，蓋上皿蓋（gài）並編號，注（zhù）意防止采樣管對樣本的汙染；要（yào）用消毒劑噴（pēn）射罩（zhào）子的內壁和轉盤，將采樣過程記錄在“潔淨級別（bié）檢測記錄”上。

17)     全部采樣（yàng）結束後，將培養皿倒置於恒溫培養箱中30℃~35℃培養（yǎng）48h；每批（pī）培（péi）養基可選3隻培養皿作對照（zhào）培養，檢驗培養基本身是否汙（wū）染。

18)     用肉眼直接計數，標記或菌落計數器上點計，然後用500倍放大（dà）鏡檢查，有否遺漏，若平（píng）板上有2個或2個（gè）以上的菌落重（chóng）疊，可分辨時仍以2個或（huò）2個以上菌落（luò）計數。

19)     浮遊菌評定標準：100級≤5/m3，萬（wàn）級≤100/m3，10萬級≤500/m3

20)     微生物檢測人在“潔淨級別檢測記錄”上記錄檢測數據，並交QA部門主管審批，每個測點的浮遊菌平均濃度必（bì）須低於設定的（de）潔淨度標準的規定。

21)     若某測點的浮遊菌平均濃度超過評定標準，則必須對此（cǐ）區域先（xiān）行消毒，然後重新取樣兩次，兩次測試結果必須合格；否則（zé）要向質量管理部經理通報，並（bìng）要采取相應的措（cuò）施。

車間淨化無菌級別（bié）請參照（zhào）國家消毒標準。